Chondrex带你了解蛋白纯化
Chondrex带你了解蛋白纯化
Chondrex公司提供一系列用于蛋白质纯化的填料树脂。Chondrex总结了下面不同蛋白纯化方法，以帮助您选择合适的填料树脂来纯化目的蛋白。
1.离子交换色谱法(1，2)
●. 每个蛋白质都带有净电荷，故蛋白质具有等电点(pI)，等电点由蛋白质的一级氨基酸序列决定。这种带电性质允许蛋白质在离子交换色谱中选择性地与带相反电荷的填料树脂结合。这项技术利用了带正电荷的树脂(阴离子交换:DEAE和Q)，或带负电荷的树脂(阳离子交换:CM)。然后，pH或盐梯度的改变会促使蛋白质从填料树脂中的被洗脱下来。
2.亲和层析(3)
●. 亲和层析是通过生物分子间强而可逆的相互结合的方式来纯化特定蛋白质的高效方法，这种方法在色谱填料树脂上固定了一种可以与其他蛋白相互作用的蛋白质，允许通过改变条件，如pH或盐浓度，选择性结合某种目标蛋白并随后洗脱该目标蛋白。
蛋白纯化填料树脂
离子交换纯化 | 抗体亲和纯化 | His-tag蛋白亲和纯化 | |
Ligand or Chemistry (Catalog #) | DEAE: 9079 (5 ml) Q:9081 (5 ml) CM: 9080 (5 ml) | Protein A:9076 (1 ml) Protein G:9077 (1 ml) | Ni-IMAC:9078 (5 ml) |
Base Support | DEAE:Highly cross-linked 6% Sepharose Q:Highly cross-linked 6% Sepharose CM:Highly cross-linked 6% Sepharose | Protein A: Rigid, highly crosslinked Agarose Protein G: Highly cross-linked 4% Sepharose | Highly cross-linked 6% Sepharose |
Formats | A drip column / column chromatography | A drip column / column chromatography | A drip column / column chromatography |
Binding Capacity (mg/ml) | DEAE: Weak anion exchange 110-160 μmol Cl- /ml media
Q: Strong anion exchange 180-250 μmol Cl- /ml media
CM: Weak cation exchange 90-130 μmol H+/ml media | Protein A: 60 mg (human IgG)/ml media
Protein G: ≥ 20 mg (human IgG/ml media | ≥ 40 mg (His-tag protein)/ml media
16-23 μmol (Ni2+) /ml media |
Equivalent Products | DEAE Sepharose 4FF Q Sepharose 4FF CM Sepharose 4FF | MabSelect sure LX Protein G Sepharose 4FF | Ni Sepharose 4FF |
Protein A/G对不同物种免疫球蛋白类型的亲和力
●. Protein A和Protein G对各种免疫球蛋白(Ig)亚型、亚类和物种表现出特异性亲和力,这种亲和力由Ig Fc区的特性决定。Chondrex在下表中列出了不同物种间Protein A和Protein G与免疫球蛋白亚类的相互作用强度。
物种 | 免疫球蛋白类型 | 与Protein A结合 | 与Protein G结合 |
Human | IgG(normal) | ++++ | ++++ |
IgG1 | ++++ | ++++ | |
IgG2 | ++++ | ++++ | |
IgG3 | - | ++++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | |
IgM | - | - | |
IgA | - | - | |
IgE | - | - | |
Mouse | IgG1 | + | ++++ |
IgG2a | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | |
Rat | IgG1 | - | + |
IgG2a | - | ++++ | |
IgG2b | - | ++ | |
IgG2c | + | ++ | |
Goat | IgG | +/- | ++ |
Rabbit | IgG | ++++ | +++ |
Sheep | IgG | +/- | ++ |
“-”:No binding，”+”:Weak binding，“++”:Binding，”+++”:Moderate Binding，”++++”:Strong Binding
参考文献：
●. P.M.Cummins.K. D.Rochfort. B.F.O'Connor, lon-Exchange Chromatography: Basic Principles and Application.Methods Mol.Biol.1485,209-223(2017).
●. A.Jungbauer,R.Hahn,"Chapter 22 lon-Exchange Chromatography" in Methods in Enzymology, R.R.Burgess, Deutscher, Murray P., Eds.(Academic Press,2009)vol.463,pp.349-371.
●. M.Urh, D.Simpson, K.Zhao, Affinity chromatography: general methods. Methods Enzymol. 463,417-438(2009)
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