TAU蛋白实验操作指南

硫黄素T 检测实验操作指南

一.在蒸馏水中制备 1mM 的硫黄素T储备液 (需是新鲜制备并用0.2 µm 注射式过滤器过滤).

二.然后用PBS pH 7.4将每个孔中的硫黄素T 储备液稀释至最终浓度为 25 µM (每孔容量 = 100 µL).

三.向每个孔中加入10 uM肝素.

四.于室温下将分装小份的tau蛋白在使用前进行解冻.

五.将纤维原或单体 (或两者都有) 加入到合适的实验孔中. 用移液器上下吸放混合孔中物质.

六.将孔板密封并放置于震荡孵育器上(800 rpm)，温度为 37°.

七.用 Molecular Devices Gemini XPS 微孔板读板机读取荧光读数, 使用软件是 Softmax Pro 版本为 6.5.1.

八.再次将孔板密封放置于震荡孵育器上, 温度为37°C.

九.在1 到 72 小时之间的固定间隔读数.

孔板: Greiner-Bio 96 Well Non-Binding Cell Culture Microplate, 黑色 (Greiner-Bio Catalog #655900).

XPS 酶标仪参数设置:

温度: 37°C

读取形式: 孔板扫描

波长: 激发光 450 nm，发射光 485 nm

PMT 增益: 自动

闪光每读: 6

震荡: 读数前 20 秒

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