StressMarq商业投产α-突触核蛋白寡聚体具有如下优点:
①高含量α-突触核蛋白寡聚体
②动态学稳定 (kinetically stable/trapped)
③不含任何诱导剂或抑制剂 (多巴胺,EGCG)
④可用于活性电泳 (Native PAGE),体内体外检测及疾病建模
⑤stressmarq能够量产α-突触核蛋白寡聚体
上图为动态学稳定(kinetically stable) 的α-突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 电镜图。该寡聚体没有使用任何诱导剂或抑制剂来锁定寡聚体状态,并且寡聚体含量能达到90%。
Stressmarq的SPR-484 的负染色透射电子显微镜图像在 80 Kv 下使用磷钨酸和醋酸铀染色在碳涂层的 400 目铜网格上获得。可以清晰的看到寡聚体结构,并且具有很高的均匀性。
动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 可在冻融后37℃下孵育两周仍然稳定
(A)冻融一次后的动态学稳定寡聚体的Native PAGE
(B)和(C)分别是冻融一次后的和37℃孵育两周后的尺寸排阻色谱(SEC)
在峰值处,90%SPR-484在冻融后37℃下孵育两周仍然稳定于寡聚体状态
动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 对多巴胺能神经元有毒性并且可以诱发帕金森病理现象(pSer129)
(A) 经寡聚体处理后 11 天,大鼠原代多巴胺能神经元的存活率由抗 MAP2 抗体量化并表示为对照的百分比
(B) 经寡聚体处理后 11 天,大鼠原代多巴胺能神经元中存在的 α-突触核蛋白 pSer129 水平通过抗 α-突触核蛋白 pSer129 抗体与抗 MAP2 抗体的比率量化,表示为对照的百分比
所有数据经过统计学验证,而非偶然性结果
动态学稳定的α突触核蛋白寡聚体(SPR-484) 在大鼠原代多巴胺能神经元中诱导帕金森相关的pSer129病理现象
(A)用对照PBS缓冲液处理后11天的大鼠原代多巴胺能神经元
(B) 用10 µg/mL SPR-484处理后11天的大鼠原代多巴胺能神经元
细胞核染色蓝色(Hoechst),多巴胺能神经元显示红色(MAP2),病理现象为绿色(α-syn pSer129)
注:SPR-484为E.coli 表达的,在加入神经元之前没有磷酸化
更多建模问题请见链接:https://www.jove.com/v/59758/generation-alpha-synuclein-preformed-fibrils-from-monomers-use
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