Mirus公司新推出转染试剂TransIT®-Lenti Transfection Reagent，该产品适用于将载体转染至贴壁的HEK 293T细胞中，可提高转染效率，增加重组慢病毒产量。
产品特点：
高性能——高达八倍的功能性滴度
操作简便——无需更换培养液基
无动物源性成分——安全可靠
产品信息
TransIT®-Lenti Transfection Reagent |
产品货号 | 产品规格 | 供应商 |
MIR 6603 | 1 × 0.3 ml | Mirusbio |
MIR 6604 | 1 × 0.75 ml | Mirusbio |
MIR 6600 | 1 × 1.5 ml | Mirusbio |
MIR 6605 | 5 × 1.5 ml | Mirusbio |
MIR 6606 | 10 × 1.5 ml | Mirusbio |
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TransduceIT™ Transduction Reagent是一款阳离子聚合物试剂，可显著提高静止和分裂期的哺乳动物细胞中逆转录病毒的转导和转基因表达。
产品信息
TransduceIT™ Transduction Reagent |
产品货号 | 产品规格 | 供应商 |
MIR 6620 | 1 ml | Mirusbio |
图1. TransIT-Lenti转染试剂具有高功能性滴度.分别使用TransIT-Lenti (3:1, vol:wt), Lipofectamine® 2000 (3:1), Lipofectamine® 3000 (3:1:1), 25 kDa PEI (6:1), 和CaPO4 precipitation (4 µg pDNA/well)五种试剂将MISSION®载体（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™载体和慢病毒包装试剂）转染至贴壁293T/17细胞中。收集上清液，过滤（0.45 µm），用293T/17细胞滴定。慢病毒转导实验使用了TransduceIT™（8 µg/ml），转导72h后使用guava easyCyte™ 5HT流式细胞仪检测GFP表达情况。功能性滴度根据病毒的稀释液与20% GFP阳性细胞进行计算。
图2. 使用TransIT-Lenti实现高效转染. 使用TransIT®-Lenti转染试剂 (3:1, vol:wt)将MISSION®载体（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™载体和慢病毒包装试剂）转染至贴壁293T/17细胞中。转染48h后检测GFP效率。图片于转染48h后拍自荧光显微镜。镜下细胞变圆和细胞融合是由于假型化重组慢病毒的VSV-G 蛋白的高表达。
重组慢病毒颗粒和靶细胞感染概述
（1） 将包括编码目的基因、水泡性口炎G蛋白（VSV-G）和必需的病毒蛋白（例如gag，pol和rev）的3-4种质粒转染至生产细胞（例如293T）中。
（2） 病毒从生产细胞浆膜以出芽的方式组装及释放到上清液中，并以VSV-G的囊膜蛋白包裹。将含有病毒的培养液用0.45微米的滤器进行过滤以除去细胞。
（3） 重组慢病毒颗粒转导靶细胞常用阳离子聚合物来增加聚合和摄取。病毒进入细胞后脱衣壳，将RNA基因组和病毒的酶暴露出来。病毒RNA被逆转录成DNA，然后整合到宿主基因组中。
（4） 转录和翻译后由细胞产生目的基因所编码的蛋白质。
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