ELISpot检测方法在癌症研究领域，特别是在评估T细胞对新型癌症疫苗应答方面，是一种可靠的方法。它检测罕见的抗原特异性T细胞的能力使其成为评估新治疗策略的有价值的免疫监测工具。最近在Nature上发表的“Personalized RNA neoantigen vaccines stimulate T cells in pancreatic cancer”的文章，展示了Memorial Sloan Kettering Cancer Center的研究人员是如何在他们开创性的研究中利用ELISpot评价胰腺癌个体化RNA新抗原疫苗。

胰腺导管腺癌(PDAC)是全球死亡率较高的癌症之一，存活率仅为12%。手术是这种癌症的唯一治愈方法，但几乎90%的患者会复发，5年生存率仅为8-10%。放射和靶向治疗的成功率有限，PDAC需要新的治疗方法。

研究发现，来自PDAC患者的原发性肿瘤具有高密度的活化CD8+ T细胞，这与疾病复发延迟和患者生存期延长相关。根据这些研究结果，纽约Memorial Sloan Kettering Cancer Center的研究人员开始开发一种新的治疗策略——刺激T细胞对抗来自PDAC的新抗原，延缓或防止疾病复发。他们测试了佐剂个体化mRNA新抗原疫苗是否能刺激新抗原特异性T细胞，并对患者有临床益处。研究人员为参加I期临床试验的每位患者开发了编码多达20种新抗原的个体化mRNA疫苗。用多次priming doses的方式对患者进行个性化疫苗免疫，同时他们还接受化疗，随后接种加强剂量的疫苗。在启动免疫接种前后以及化疗和接种加强剂量疫苗后采集血样，以评估T细胞反应。

图1. 该文章总结的新抗原疫苗设计、给药和使用Mabtech的ELISpot Pro:人IFN-γ试剂盒评估T细胞响应水平示意图。

研究人员使用了Mabtech的ELISpot Pro: Human IFN-γ试剂盒，结果发现50%的患者在接种疫苗后可检测到新抗原特异性T细胞。此外，他们分别测试了每种特定的新抗原，发现其中11%诱导了足够的高强度T细胞反应。结果证明了ELISpot是能评价筛选针对230种新抗原具有反应性T细胞响应的有效工具。这些数据帮助研究人员在疫苗设计方面取得更有价值的进展。

除了确定哪些新抗原诱导了T细胞的反应，研究人员还能够在新抗原特异性T细胞的供体中测量polytopic responses(对> 1种新抗原的反应)。组内患者polytopic responses的幅度变化由ELISpot检测，结果显示反应范围从每百万PBMC的100 spot-forming units(SFU)到每百万PBMC的 > 2，000 SFU。

ELISpot分析在评估抗原特异性免疫反应中是一种极其敏感和有价值的检测技术。人们可以筛选大量抗原并检测罕见的反应细胞，从ELISpot获得的信息可以指导未来的疫苗设计，也可以指导研究设计，对应答T细胞进行更深入的分析。

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参考文献：Rojas et al., Personalized RNA neoantigen vaccines stimulate T cells in pancreatic cancer, Nature 2023

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