自1997年始，GeneTex一直致力于为科研、医药、诊断开发高质量水平的抗体。目前市场上存在很多低质量的抗体，主要表现在有明显的非特异性信号；为了提供抗体的特异性和可重复性，必须解决两个问题，第一是广泛采用重组抗体技术的生产平台，第二是采取更多的验证策略。为了通过创新技术给客户提供更好的产品，GeneTex已将所有新生产转向重组兔单克隆抗体，也采取更多的验证策略，提供更多的高质量水平抗体。

什么是重组抗体？

重组抗体 (Recombinant antibody，rAb) 是通过传统杂交瘤方法、单独或组合展示策略、从免疫动物中分选单个B细胞或通过任一种方法获得的选定单克隆抗体的克隆。重组抗体是由其一级序列定义的，可以对其进行工程改造以优化亲和力并以不同的结合形式表达，重组抗体的众多优点已得到充分证明，其中性能的一致性至关重要。

GeneTex的重组抗体生产采用以多参数FACS为基础的方法，从免疫动物中分离抗原特异性IgG+记忆B细胞，随后将抗体可变区基因克隆到IgG主链中，并在哺乳动物细胞中表达（图1）(ref 1)。该方法非常快速，可以在几周内完成，并且还提供了鉴别出在各种应用中具有不同功能抗体的机会，重要的是，它是从同一B细胞克隆重链和轻链，从而保留自然配对，一旦完成克隆，特定的重组抗体就可以取之不尽用之不竭，并且具有出色的重复性。

图1：GeneTex 重组兔单克隆抗体生产流程（Starkie 等人 (2016)）

GeneTex重组兔单克隆抗体

GeneTex 的生产重点是创建新型重组兔单克隆抗体，并使用国际抗体验证工作组（IWGAV）定义的严格方法进行验证。结合重组抗体生产的重点，GeneTex对抗体可靠性的第二个承诺是将依照上述IWGAV提出的严格验证方法纳入其制造和质量保证 (QA) 工作流程（ref 2），使用IWGAV报告定义的五个验证策略中的至少一个来评估每个抗体，GeneTex版本的IWGAV遵循五个验证策略，包括 (1) 敲除敲弱策略；(2) 比较抗体策略；(3) 免疫捕获及质谱分析（IP/MS）；(4) 生物特性与正交策略；(5) 蛋白过表达策略（图2）。在提及新的重组抗体生产时，GeneTex将此称为“5+1”验证策略，“+1”指的是来自于重组抗体生产过程中的事前验证。

使用上述生产和验证方法生成和评估的新重组兔单克隆抗体（这些产品在其克隆名称中用“HL”标识）。这仅仅是一个开始，GeneTex还致力于用新的重组抗体取代其成功的多克隆体。

图2：GeneTex用于重组抗体验证的“5+1”验证策略

为什么GeneTex源自于兔的HL克隆是更好的选择？

GeneTex的重组兔单克隆抗体生产工艺是全部源自于兔的新型抗体生成平台（ref 1），这些产品通过其各自克隆号中的“HL”名称进行区分（例如“[HL1089]”）。

众所周知，兔的免疫系统，可以为产生单克隆抗体带来以下显着优势（图3）(ref 3)：

l   更广泛的抗体库

1、兔属于兔形目，在进化上与啮齿目不同，说明人类抗原呈现的表位在兔中通常比在小鼠中更具有免疫原性，从而增加了生成的抗体数量，这些抗体反过来可能与鼠蛋白同源物发生交叉反应 (ref 3-6)。

2、兔免疫系统在对半抗原或小分子抗原产生免疫反应方面更成功，而鼠免疫系统通常不会出现这种情况 (ref 3-6)。

3、用于产生单克隆抗体的小鼠来自近交系，其免疫原性的反应多样性低于兔；且小鼠脾脏比兔子脾脏小得多 (ref 3-6)。

4、兔的免疫系统与小鼠和人类的不同之处在于，除了执行与小鼠和人类相同的V(D)J和VJ重组以及体细胞超突变 (SHM) 机制之外，它还利用体细胞基因转换 (SGC) 来扩展其抗体范围，抗体多样性通过其他过程进一步增强，包括kappa轻链可变基因结构，其独特之处在于互补决定区3 (LCDR3) 长度的可变性，以及骨髓、肠道相关淋巴组织中的连续Ig发育，以及脾脏和淋巴结生发中心（ref 4,6）。

l   更简单的Ig结构

1、已知欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)具有IgE和IgM单一基因，没有IgD基因。有趣的是，它的基因组包含13个IGHA基因，编码至少10个功能性IgA亚类，尽管存在等位基因变异，但兔只有一种IgG基因（没有亚类），因此与小鼠和人类（各有4个IgG亚类）不同 (ref 5,6)。

2、除了人或小鼠IgG中发现的二硫键（将重链对或一条重链与其相关轻链连接）之外，兔IgG抗体在其K1轻链中还表现出独特的链内二硫键，新西兰白兔中大约90%的IgG是IgG-k (K1)，并且这种额外的键被认为赋予兔IgG稳定性 (ref 3,6)。

l   更高的结合亲和力

1、兔单克隆抗体具有非常高的亲和力，Kd值在皮摩尔范围内，其中一些具有极低的皮摩尔Kd值 (ref 3,6)。

2、皮摩尔Kds意味着更高的灵敏度和一致的特异性。

l   更大的淋巴细胞库

1、兔的寿命更长，而且体型更大（三个月大的兔子和六周大的小鼠的体重可能相差100倍），大大地方便了抗体生产过程中的血液和组织取样 (ref 6)。

2、与鼠脾脏相比，兔脾脏可分离出多50倍的B细胞，这说明有更多可识别更广泛表位的克隆可以选择 (ref 3-6)。

图3：兔生产单克隆抗体的优势

部分精选重组兔单克隆抗体

G蛋白偶联受体，GPCRs
GTX637589	RAI3 antibody   [HL1864]
GTX636952	Dopamine   Receptor D2 antibody [HL1478]
GTX639056	CXCR2 antibody   [HL2604]
肿瘤研究
GTX635362	RAS (G12D   Mutant) antibody [HL10]
GTX635975	PD-L1 antibody   [HL1041]
GTX635479	53BP1 antibody   [HL275]
神经科学研究
GTX635363	Iba1 antibody   [HL22]
GTX636725	GFAP antibody [HL1307]
GTX636586	Calbindin   antibody [HL2378]
病毒研究
GTX637298	Zika Virus   Envelope protein antibody [HL1699]
GTX636703	ASFV p54   antibody [HL1289]
GTX636318	Influenza A   Virus Nucleoprotein antibody [HL1103]
免疫学研究
GTX636887	IL1 beta antibody   [HL1421]
GTX632502	CXCL16 antibody   [GT516]
GTX636896	Gasdermin D   antibody [HL1430]
代谢研究
GTX637799	Apolipoprotein B   antibody [HL1962]
GTX636995	FABP4 antibody   [HL1521]
GTX638193	Fatty Acid   Synthase antibody [HL2161]
蛋白翻译后修饰相关抗体
GTX635617	ERK1 (phospho   Thr202/Tyr204) + ERK2 (phospho Thr185/Tyr187) antibody [HL173]
GTX636086	ATM (phospho   Ser1981) antibody [HL1062]
GTX635799	JNK (phospho   Thr183/Tyr185) antibody [HL1008]
细胞器标记
GTX638140	alpha Tubulin   antibody [HL2162]
GTX70141	DNA ligase I   antibody [10H5]
GTX636469	Cytokeratin 19   antibody [HL1165]
表位标记、报告和载体抗体
GTX637082	HA tag antibody   [HL1603]
GTX637570	GFP antibody   [HL1845]
GTX637460	CRM197 antibody   [HL1808]

参考文献

1、Starkie, Dale O et al. “Generation of Recombinant Monoclonal Antibodies from Immunised Mice and Rabbits via Flow Cytometry and Sorting of Antigen-Specific IgG+ Memory B Cells.” PloS one vol. 11,3 e0152282. 29 Mar. 2016, doi:10.1371/journal.pone.0152282.

2、Uhlen, Mathias et al. “A proposal for validation of antibodies.” Nature methods vol. 13,10 (2016): 823-7. doi:10.1038/nmeth.3995.

3、Feng, Lifeng et al. “Rabbit monoclonal antibody: potential application in cancer therapy.” American journal of translational research vol. 3,3 (2011): 269-74.

4、Mage, Rose G et al. “B cell and antibody repertoire development in rabbits: the requirement of gut-associated lymphoid tissues.” Developmental and comparative immunology vol. 30,1-2 (2006): 137-53. doi:10.1016/j.dci.2005.06.017.

5、Pinheiro, A., Neves, F., Lemos de Matos, A. et al. An overview of the lagomorph immune system and its genetic diversity. Immunogenetics 68, 83–107 (2016).

6、Weber, Justus et al. “From rabbit antibody repertoires to rabbit monoclonal antibodies.” Experimental & molecular medicine vol. 49,3 e305. 24 Mar. 2017, doi:10.1038/emm.2017.23.

更多详情请咨询Genetex独家代理商-欣博盛生物

全国服务热线: 4006-800-892            邮箱: market@hnyazd.com

深圳: 0755-26755892      北京: 010-88594029       上海: 021-34613729     

广州: 020-87615159        香港: 852-69410778

代理品牌网站: www.hnyazd.com

自主品牌网站: www.neobiosescience.net