Funakoshi新产品----AllView PAGE Buffer

2021-04-29

浏览次数： 81

AllView PAGE Buffer是一种新型的SDS-PAGE蛋白电泳缓冲液。这款缓冲液具有一个显著的特点就是能够在碱性的Laemmli凝胶（Tris-HCl）中分离不同分子量大小的蛋白质，类似于“梯度凝胶”的使用。建议使用丙烯酰胺浓度为6%的分离胶和3%的浓缩胶，以分离分子量约在10 kDa至250 kDa的范围的蛋白。电泳后的聚丙烯酰胺凝胶可直接用于CBB染色、银染或western印迹。

产品特点：

1. 节省成本和时间（不需要梯度凝胶）

2. 使用mini gel只需13分钟即可完成电泳

3. 适用于之后进一步的分析实验:例如CBB染色、蛋白质印迹等

操作步骤：

1. 用超纯水将20×的AllView PAGE Buffer稀释至1×工作液。（例如，取25 ml的AllView PAGE Buffer到475 ml 的超纯水中.）

2. 将凝胶放入电泳槽中。

3. 将1×AllView PAGE Buffer注入电泳槽中。

4. 点样以及加入蛋白marker

5. 开始电泳，电泳条件设置如下。

Gel	Voltage	Time
Mini gel (8 × 10 cm, 1 mm thick)	250 V (Constant voltage)	13-15 min

注意：

AllView PAGE Buffer适用于Laemmli凝胶（见下文“推荐用法”）。

如果使用预制凝胶，则最佳丙烯酰胺浓度可能不同。

AllView PAGE Buffer不可重复使用。

AllView PAGE Buffer是20×原液。使用前请稀释至1倍工作液。

如果观察到SDS沉淀，使用前将其放在水浴（约37°C）中使其完全溶解。

最佳电泳时间取决于丙烯酰胺浓度、凝胶大小和电压。

建议使用MW Marker作为标记。(e.g. DynaMarker® Protein MultiColor Stable II, Code#DM660).

推荐用法：

建议丙烯酰胺的浓度为6%的分离胶和3%的浓缩胶，以分离分子量大概10 kDa至250 kDa范围的蛋白。特别是在需要分离低分子量蛋白质（10kda~30kda）的情况下，建议使用10%的分离胶。

1. 准备胶 (Laemmli’s method)

表1，聚丙烯酰胺分离胶和浓缩胶配方（2 mini gels）

	Stacking gel (6 ml)	Resolving gel (15 ml)
Gel percentage	3%	6%	10%
Ultrapure water	3.9 ml	8.05	6.05
1.5M Tris-HCl (pH8.8)	1.5	3.75	3.75
30% Acrylamide/Bis solution	0.6	3.0	5.0
10% SDS	0.06	0.15	0.15
TEMED	0.003 (3 µl)	0.00375 (3.75 µl)	0.00375(3.75 µl)
10% APS	0.06	0.05	0.05

Funakoshi新产品----AllView PAGE Buffer

上图为 DynaMarker^® Protein MultiColor Stable II, Code#DM660

2.电泳图

AllView PAGE Buffer与Laemmli electrophoresis running buffer（Tris-Glycine-SDS）的使用区别在于蛋白质迁移率不同。通过对AllView PAGE Buffer和Laemmli gel（Tris-HCl）的结合使用，可以像梯度凝胶一样分离大范围的蛋白质大小，如下图。

Funakoshi新产品----AllView PAGE Buffer